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食用菌種的保藏方法有很多,常采用的有斜面低溫保藏法,常溫生理鹽水保藏法、液體石蠟保藏法,有條件的還可采用冷凍真空干燥保藏法。這些方法各有其優(yōu)缺 點(diǎn),生產(chǎn)者可根據具體情況,選用適宜的保藏法。一種好的保藏方法,應能較長(cháng)時(shí)期地保持菌種的原有優(yōu)良特性,同時(shí)具有經(jīng)濟、簡(jiǎn)便、實(shí)用等特點(diǎn).
菌種保藏
(一)、菌種保藏的目的 微生物在使用和傳代過(guò)程中容易發(fā)生污染、變異甚至死亡,因而常常造成菌種的衰退,并有可能使優(yōu)良菌種丟失。菌種保藏的重要意義就在于盡可能保持其原有性狀和活力的穩定,確保菌種不死亡、不變異、不被污染,以達到便于研究、交換和使用等諸方面的需要。
(二)、菌種保藏的原理 無(wú)論采用何種保藏方法,首先應該挑選典型菌種的優(yōu)良純種來(lái)進(jìn)行保藏,最好保藏它們的休眠體,如分生孢子、芽孢等。其次,應根據微生物生理、生化特點(diǎn),人為地創(chuàng )造環(huán)境條件,使微生物長(cháng)期處于代謝不活潑、生長(cháng)繁殖受抑制的休眠狀態(tài)。這些人工造成的環(huán)境主要是干燥、低溫和缺氧,另外,避光、缺乏營(yíng)養、添加保護劑或酸度中和劑也能有效提高保藏效果。
(三)、菌種保藏的方法
1、斜面低溫保藏法 將菌種接種在適宜的斜面培養基上,待菌種生長(cháng)完全后,置于4℃左右的冰箱中保藏,每隔一定時(shí)間(保藏期)再轉接至新的斜面培養基上,生長(cháng)后繼續保藏,如此連續不斷。此法廣泛適用于細菌、放線(xiàn)菌、酵母菌和霉菌等大多數微生物菌種的短期保藏及不宜用冷凍干燥保藏的菌種。放線(xiàn)菌、霉菌和有芽孢的細菌一般可保存6個(gè)月左右,無(wú)芽孢的細菌可保存1個(gè)月左右,酵母菌可保存3個(gè)月左右。如以橡皮塞代替棉塞,再用石蠟封口,置于4℃冰箱中保藏,不僅能防止水分揮發(fā)、能隔氧,而且能防止棉塞受潮而污染。這一改進(jìn)可使菌種的保藏期延長(cháng)。 該法的優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便易行,容易推廣,存活率高,故科研和生產(chǎn)上對經(jīng)常使用的菌種大多采用這種保藏方法。其缺點(diǎn)是菌株仍有一定程度的代謝活動(dòng)能力,保藏期短,傳代次數多,菌種較容易發(fā)生變異和被污染。
2、石蠟油封藏法 此法是在無(wú)菌條件下,將滅過(guò)菌并已蒸發(fā)掉水分的液體石蠟倒入培養成熟的菌種斜面(或半固體穿刺培養物)上,石蠟油層高出斜面頂端lcm,使培養物與空氣隔絕,加膠塞并用固體石蠟封口后,垂直放在室溫或4℃冰箱內保藏。使用的液體石蠟要求優(yōu)質(zhì)無(wú)毒,化學(xué)純規格,其滅菌條件是:150~170℃烘箱內滅菌lh;或121℃高壓蒸汽滅菌60~80min,再置于80℃的烘箱內烘干除去水分。由于液體石蠟阻隔了空氣,使菌體處于缺氧狀態(tài)下,而且又防止了水分揮發(fā),使培養物不會(huì )干裂,因而能使保藏期達1~2年,或更長(cháng)。這種方法操作簡(jiǎn)單,它適于保藏霉菌、酵母菌、放線(xiàn)菌、好氧性細菌等,對霉菌和酵母菌的保藏效果較好,可保存幾年,甚至長(cháng)達10年。但對很多厭氧性細菌的保藏效果較差,尤其不適用于某些能分解烴類(lèi)的菌種。